凡對(duì)抗體無(wú)毒性又具有高催化效率的酶,理論上均可標(biāo)記抗體。但免疫酶組織化學(xué)技術(shù)要求酶與底物作用生成的有色產(chǎn)物能在光鏡及電鏡下觀察到,所以這些產(chǎn)物必須具備兩個(gè)條件:*,產(chǎn)物必須是不透光或不透電子的,否則不能被光鏡及電鏡觀察到;第二,產(chǎn)物必須是不溶解的,否則產(chǎn)物將發(fā)生擴(kuò)散,影響其準(zhǔn)確定位。而理想的酶也應(yīng)盡可能符合下列標(biāo)準(zhǔn):
①性質(zhì)穩(wěn)定,活性高;
②該酶較易獲得純制品,而且純度要很高;
③酶與免疫球蛋白等物質(zhì)結(jié)合時(shí)不喪失其活性;
④酶反應(yīng)產(chǎn)物必須穩(wěn)定,不應(yīng)發(fā)生擴(kuò)散,影響組織學(xué)定位;
⑤酶相應(yīng)底物易于保存、制備;
⑥被檢組織中沒有與底物有關(guān)的酶作為內(nèi)源性組分存在。
*具備上述條件的酶并不多見,目前常用于標(biāo)記的酶有辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶(glucoseoxdase,GOD)、b-半乳糖苷酶、葡萄糖淀粉酶、乙酰膽堿酯酶等。其中辣根過(guò)化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶應(yīng)用比較廣泛,且絕大部分免疫酶組織化學(xué)技術(shù)使用HRP酶是一種*的蛋白質(zhì)催化活性物質(zhì),現(xiàn)代技術(shù)已可生產(chǎn)100%純的酶,如HRP和AKP等,它們的催化效率非常高,
分子高純度酶在lmin內(nèi)可催化10000~1000000分子的底物。酶的活性高低將依賴于下列幾種可變參數(shù):
①酶和底的濃度;
②緩沖液的pH值和鹽的濃度;
③溫度和光線。
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