預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測定大鼠血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)含量。
實驗原理
用純化的ACE抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加進標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的ACE抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*的。顏色的深淺和樣品中的ACE呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(
試劑盒組成及試劑配制
1、 酶標(biāo)板:一塊(96孔)
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
6、 檢測溶液A:1×120
7、 檢測溶液B:1×120
8、 底物溶液:1×10ml/瓶。
9、 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。
11、覆膜:5張
12、使用說明書:1份
操縱步驟
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37
1、 加樣:分別設(shè)空缺孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??杖笨准訕悠废♂屢?100
性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、 棄往液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100
3、 棄往孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400
4、 每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100
5、 棄往孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90
7、 每孔加終止溶液50
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長丈量各孔的光密度(
1、 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,
本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
2、 *的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操縱以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必
預(yù)備充足的標(biāo)本備份。
3、 在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和微生物的 污染,由于蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
4、 試劑盒保存:請收到試劑盒后盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A和檢測溶液B保存于-20
5、 濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
6、 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
7、 有效期:6個月。
8、 本操縱說明適用于48T試劑盒,但48T試劑盒所有試劑減半。
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