抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后,雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體,若溶液中無電解質(zhì)參加,仍不出現(xiàn)可見反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1-,可分別中和膠體粒子上的電荷,使膠體粒子的電勢(shì)下降。當(dāng)電勢(shì)降至臨界電勢(shì)(12~15mV)以下時(shí),則能促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出,形成可見的沉淀物或凝集物。影響抗原抗體反應(yīng)的因素主要有以下兩點(diǎn),另外,適當(dāng)振蕩也可促進(jìn)抗原抗體分子的接觸,加速反應(yīng)。
(一)溫度
在一定范圍內(nèi),溫度升高可加速分子運(yùn)動(dòng),抗原與抗體碰撞機(jī)會(huì)增多,使反應(yīng)加速。但若溫度高于56℃時(shí),可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離,甚至變性或破壞;在40℃時(shí),結(jié)合速度慢,但結(jié)合牢固,更易于觀察。常用的抗原抗體反應(yīng)溫度為37℃。每種試驗(yàn)都有其*的zui適反應(yīng)溫度,例如冷凝集素在4左右與紅細(xì)胞結(jié)合,20℃以上反而解離。
(二)酸堿度
抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行。蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì),因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點(diǎn)??乖贵w反應(yīng)一般在pH為6~8進(jìn)行。PH過高或過低都將影響抗原與抗體的理化性質(zhì),例如pH達(dá)到或接近抗原的等電點(diǎn)時(shí),即使無相應(yīng)抗體存在,也會(huì)引起顆粒性抗原非特異性的凝集,造成假陽性反應(yīng)。
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