很多人在做檢測的時分,都不太在意ELISA試劑盒中的說明書上的檢測過程,覺得自己都知道,都懂的。但就是由于這種心態(tài),所以形成有時分的檢測結(jié)果出現(xiàn)失誤。生物檢測原本就是個很嚴(yán)格并且嚴(yán)謹(jǐn)?shù)氖虑?,你的一個小的疏忽或許就會形成意想不到的錯誤。
正確的運(yùn)用ELISA試劑盒的過程:
1.在運(yùn)用之前要將試劑充沛的混合均勻,可是要注意在搖晃的時分不要產(chǎn)生過多的泡沫,從而形成有太多的空氣進(jìn)入試劑中,產(chǎn)生測試差錯。
2.根據(jù)要檢測樣品的數(shù)量來確定的板條數(shù)。每個比對的樣品和空白孔是做復(fù)孔,而樣品的數(shù)量就可以自己視情況而定,不過能用復(fù)孔的仍是用復(fù)孔。將標(biāo)本液體1:1稀釋后倒入50微升的反應(yīng)孔中。
3.在反應(yīng)孔中在參加50微升的待測樣品,然后馬上參加50微升的生物素標(biāo)記抗體,蓋上模板,輕輕搖晃使其混合均勻后,ELISA試劑盒在37攝氏度的恒溫下等候1小時。
4.將孔內(nèi)液體甩去,加滿洗刷液,震動約30秒后,在甩去洗刷的液體,用紙將水吸干。這姿態(tài)重復(fù)三次。再在沒空參加80微升的親和鏈酶素-HRP,同上混合均勻后,在37攝氏度的恒溫環(huán)境下等候半小時。
5.同過程四的洗刷辦法。洗刷潔凈后,在沒空中參加底物A,B各50微升,小心混合均勻,避免光照在37攝氏度下等候10分鐘。
6.取出酶標(biāo)板,敏捷參加停止液50微升,測定結(jié)果。在450納米的波長處檢測各個孔的OD值。
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