我們在用ELISA顯色法測定乙肝五項的過程中，會不同程度出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。經(jīng)過觀察與分析，總結(jié)了ELISA法測定乙肝五項中出現(xiàn)假陽性的幾種原因，來與科研工作者進行分享和探討，以便在未來工作中避免出現(xiàn)錯誤，提高我們的實驗效率和水平。
在一次檢測試驗中，我們發(fā)現(xiàn)所做乙肝五項的反應(yīng)板都呈現(xiàn)藍色，經(jīng)過仔細查找原因，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，操作中將待顯色的反應(yīng)板置于6%“84”消毒液剛擦拭過的桌面上，會使其反應(yīng)結(jié)果均顯藍色。為進一步證實，我們便做了以下試驗。

1 材料
1.1 “84”消毒液購自上海利康消毒高科技有限公司。
1.2 乙肝五項ELISA試劑盒購自上海信然生物有限公司。

2 方法與結(jié)果
2.1 方法
將已知的HBsAg陽性、陰性和弱陽性的血清操作至顯色時，分為6組，分別于1min、5min、10min、15min、20min、25min加上顯色劑后，置于用6%“84”消毒液擦試過的桌面上（桌面上無明水，但有濕度）放置15min至25min觀察結(jié)果。當20min過后，我們發(fā)現(xiàn)，其結(jié)果均呈藍色。

2.2 結(jié)果
將已知的HBsAg陽性標本操作至加顯色劑后分別加入不同濃度“84”消毒液5μl。隨“84”消毒液濃度減少其顯色逐漸呈:黃綠、棕紅、淡藍、藍色，至0.001%濃度無顏色改變。

3 討論
我們所用ELISA法中的“B”顯色劑，主要成份是四甲基聯(lián)苯胺（TMB），而酶標記物中的酶為辣根過氧化物酶。“84消毒液的主要成份為要效氯，分解后的游離氯能取代ELISA顯色劑B液（TMB）上的氫，使其呈藍色（鹵代反應(yīng)），而高濃度的“84”消毒液呈酸性，可使TMB呈。
由此可見，當“84”消毒液在空氣中的濃度大于0.001%時，即可對ELISA法的顯色造成影響，使結(jié)果為假陽性。因此我們認為，“84”消毒液可對ELISA法所有以TMB做底物的試驗有影響。為找到有效的解決假陽性的辦法，我們打開門窗、換氣扇，工作人員的手和衣物均不接觸“84”消毒液，再把所有的標本重新洗滌5次，加上顯色劑，除弱陽性標本外，其余均與未被干擾結(jié)果相符。故被“84”消毒液影響的標本均應(yīng)重做，以免影響結(jié)果。